Kloning Gen

Perkembangan bioteknologi semakin menarik ketika era rekayasa genetika datang di tahun 70-an. Saat itu mulai dipublikasikannya teknik rekombinan DNA oleh Stanley Cohen dari Stanford University dan Herbert Boyer dari University of California. Dengan teknik ini kita dimungkinkan memproduksi protein di dalam sel yang dikultur. Orang menyebut era ini dengan era bioteknologi modern.

Dalam teknik rekombinan DNA, satu DNA yang menjadi target (misalnya DNA yang mengandung gen Insulin untuk memproduksi protein insulin yang penting untuk terapi penyakit diabetes) disambungkan dengan DNA lain yang menyebabkan DNA target bisa digandakan dalam jumlah yang besar. DNA lain yang disambungkan dengan DNA target ini kita kenal dengan cloning vector (contohnya plasmid, cosmid, Bacterial Artificial Chromosomes, Yeast Artificial Chromosomes, dll).

Ketika DNA target berhasil disambungkan (melalui teknik enzimatis) dengan DNA Cloning Vector (misalnya plasmid), maka terlahirlah DNA rekombinan. DNA rekombinan ini yang nantinya akan kita perbanyak dengan teknik kloning gen (bukan teknik kloning untuk menghasilkan individu baru looh, seperti kasus domba dolly!).

Berikut sedikit saya perlihatkan skema teknik kloning gen untuk menghasilkan atau memperbanyak (klon) DNA target kita (diambil dari riset tesis S2 saya).

Melihat skema di atas, untuk memperbanyak DNA terget melalui teknik kloning butuh tahapan yang tidak sedikit, dari mulai isolasi DNA target, lalu perbanyakannya melalui teknik PCR (polymerase chain reaction), pemurnian DNA target, penyambungan DNA target dengan DNA vector cloning (saya menggunakan plasmid pCR 2.1-TOPO) sehingga menghasilkan vector rekombinan, teknik pentransferan vector rekombinan ke inang tertentu (dalam hal in dipilih bakteri Escherichia coli TOP10) untuk perbanyakan, sampai teknik sekuensing untuk melihat urutan DNA target yang sudah diperbanyak apakah masih benar atau tidak.

Insya Alloh teknik-teknik ini akan dibahas lebih detail pada kesempatan yang akan datang.