TRANSFORMASI KEJUT-PANAS

Transformasi merupakan salah satu tahap dalam teknik kloning gen. Tujuan dari transformasi adalah mentransfer molekul DNA rekombinan ke dalam sel inang (host). Saya misalkan inang yang digunakan adalah sel bakteri Escherichia coli (umum digunakan dalam teknologi kloning gen).

Sel E.coli yang digunakan bukan sembarang sel. Sel E.coli harus mengalami pengkondisian sehingga siap dijadikan inang untuk proses transformasi. Dalam istilah ilmiahnya, sel E.coli dibuat kompeten terlebih dahulu. Makanya dalam dunia kloning gen dikenal dengan sebutan competent cells. Yang menjadi pertanyaan, bagaimana membuat sel E.coli menjadi transforman??

Sebagian kita membuat pilihan praktis. Tinggal pesan ke vendor tertentu, lalu tinggal pakai. Beberapa yang lainnya lebih memilih mengkondisikan sendiri sel E.coli-nya supaya bisa kompeten dimasuki molekul DNA rekombinan. Lalu bagaimana tekniknya? Salah satunya, sel dibuat kompeten secara kimia atau menambahkan senyawa kimia tertentu seperti adalah CaCl2 (calcium chloride). Muatan Ca2+ dalam CaCl2 akan mengganggu muatan gugus fosfat dari senyawa fosfolipid, penyusun membran sel bakteri. Gangguan ini akan menyebabkan membran sel bakteri lebih mudah dimasuki oleh molekul DNA rekombinan. Prosedur detailnya dapat dilihat di link berikut: making competent cells

Setelah sel kompeten sudah disiapkan, transformasi molekul DNA rekombinan dapat dilakukan. Terdapat beberapa metode transformasi molekul DNA rekombinan ke dalam sel inang E.coli. Teknik yang paling sederhana adalah HEAT-SHOCK METHOD atau METODE KEJUT-PANAS. Intinya molekul DNA rekombinan dan sel E.coli kompeten ditempatkan di tabung yang sama. Campuran didinginkan dalam es 30 menit, dipanaskan dalam air suhu 42oC selama 45 detik, dan didinginkan lagi dalam es selama 5 menit. Semua dilakukan secara cepat. Harapannya saat sel bakteri di panaskan, maka pori-pori sel bakteri akan membuka dan molekul DNA rekombinan dapat masuk ke dalam sel inang E.coli. Pori-pori akan menutup kembali ketika sel E.coli didinginkan. Sel E.coli yang sudah mengandung molekul DNA rekombinan disebut dengan transformant cells. Sel ini selanjutnya ditumbuhkan dalam media tertentu untuk menjalani tahapan kloning selanjutnya.